詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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應用領域 | 醫療衛生,環保,化工,生物產業,綜合 |
RNApure(TRIzol)是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍廣泛,可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養細胞等 樣品中提取總RNA。樣品在RNApure中被充分裂解的同時能夠***限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相, RNA分布在上清層中。收集上清層后,經異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總 RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學常規實驗,如RT-PCR、 Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等。
自備試劑
氯仿(新開封或提取 RNA 專用)、無水乙醇。
操作步驟
1.各種材料的處理
1)植物組織:取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或將植物組織剪碎后直接在 RNApure中迅速研磨,每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure,渦旋混勻。
注意:樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
2)動物組織:取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎,每 30-50mg 組織加入 1mlRNApure,勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入 1ml RNApure 混勻。
注意:樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
3)單層培養細胞:吸去培養液,可直接在培養板中加入適量 RNApure(每 10cm2面積需要 1ml RNApure),用取樣器反復吹打使細胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后,將細胞溶液轉移至 Rnase-free 的離心管中,13000×g 離心 5 分鐘,收集細胞沉淀,仔細吸除所有上清,加入 1ml RNApure 混勻。
注意:a. 收集細胞數量不要超過 1×10?。
b. RNApure 加量根據培養板面積決定,不是由細胞數決定。如果 RNApure 加量不足,可能導致提取的 RNA 中有 DNA 污染。
c. 收集細胞時一定要將細胞培養液去除干凈,否則會導致裂解不全,造成 RNA 的產量降低。
4)細胞懸液:離心收集細胞。每 5×10?-1×10?動物、植物和酵母細胞或每 10?細菌細胞加入 1 ml RNApure。
注意:
a. 加入 RNApure 前不要洗滌細胞,以免 RNA 降解。
b. 一些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理。
5)血液處理:直接取新鮮的血液,加入 3 倍體積 RNApure(推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure),充分振蕩混勻。
6)可選步驟:對于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質含量高的樣品,如肌肉組織、脂肪組織或植物的塊莖,可以在勻漿處理后 4℃,13,000×g 離心 10 分鐘以除去不溶物質,此時沉淀中含胞外物質、多糖和高分子量的 DNA,而 RNA 存在于上清中。
2.樣品中加入 RNApure 后反復吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鐘,使蛋白核酸復合物*全分離。
3.以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩 15 秒,室溫放置 2 分鐘。
4.4℃ 13,000×g 離心 10 分鐘,此時樣品分為三層:紅色有機相,中間層和上層無色水相,RNA 主要在上層水相中,將上層水相移到一個新的 Rnase-free 離心管(自備)中。
5.在得到的水相溶液中加入等體積異丙醇,顛倒混勻,室溫放置 10 分鐘。
6.4℃ 12,000×g 離心10分鐘,棄上清。
7.加入75%乙醇(用Rnase-free Water配制)洗滌沉淀。每使用1ml RNApure用1ml75%乙醇對沉淀進行洗滌。
8.4℃ 12,000×g 離心3分鐘,小心吸棄上清,注意不要吸棄RNA沉淀。
注意:剩余的少量液體可短暫離心,然后用槍頭吸出,注意不要吸棄沉淀。
9.室溫放置 2-3 分鐘,晾干。加入 30-100ul Rnase-free Water,充分溶解 RNA,得到的RNA 保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要過分干燥,以免難于溶解。
本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途
上海牧榮生物科技有限公司
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