簡要描述:高純總RNA提取試劑盒,本試劑盒是基于特殊優(yōu)化的裂解液 RNApure 和 RNA 吸附柱的柱式總 RNA 提取試 劑盒
詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合 |
高純總RNA提取試劑盒
本試劑盒是基于特殊優(yōu)化的裂解液 RNApure 和 RNA 吸附柱的柱式總 RNA 提取試 劑盒,裂解液充分裂解并勻質(zhì)化樣本,采用*特的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù),通過離心吸附柱 在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)合溶液中的 RNA,同時***限度的有效除去蛋白質(zhì)、無機鹽 離子及有機雜質(zhì)等;可從動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細胞等樣品中快速提 取總 RNA,每次可處理 30-50mg 組織或 5×106細胞,可同時處理多個不同樣品。本試劑 盒提取得到的 RNA可直接應(yīng)用于 RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等實驗。
自備試劑
氯仿(新開封或提取 RNA 專用)、無水乙醇。
操作步驟
1.各種材料的處理
1)植物組織:取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在 RNApure中迅速研磨,每 30-50 mg 組織加入 1ml RNApure,渦旋混勻。注意:樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
2)動物組織:取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎,每 30-50mg 組織加入 1ml RNApure,勻漿儀進行勻漿處理。或在液氮中研磨后加入 1ml RNApure 混勻。注意:樣品體積一般不要超過 RNApure 體積的 10%。
3)單層培養(yǎng)細胞:吸去培養(yǎng)液,可直接在培養(yǎng)板中加入適量 RNApure(每 10cm2面積需要 1ml RNApure),用取樣器反復(fù)吹打使細胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后,將細胞溶液轉(zhuǎn)移至 Rnase-free 的離心管中,13000×g 離心 5 分鐘,收集細胞沉淀,仔細吸除所有上清,加入 1ml RNApure 混勻。
注意:
a. 收集細胞數(shù)量不要超過 1×10?。
b. RNApure 加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定,不是由細胞數(shù)決定。如果 RNApure 加量不足,可能導(dǎo)致提取的 RNA 中有 DNA 污染。
c. 收集細胞時一定要將細胞培養(yǎng)液去除干凈,否則會導(dǎo)致裂解不全,造成 RNA 的產(chǎn)量降低。
4)細胞懸液:離心收集細胞。每 5×10?-1×10?動物、植物和酵母細胞或每 10?細菌細胞加入 1 ml RNApure。
注意:
a. 加入 RNApure 前不要洗滌細胞,以免 RNA 降解。
b. 一些酵母和細菌細胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理。
5)血液處理:直接取新鮮的血液,加入 3 倍體積 RNApure(推薦 0.25ml 全血加入 0.75mlRNApure),充分振蕩混勻。
6)可選步驟:對于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品,如肌肉組織、脂肪組
規(guī)格 100 次
適用范圍:
RNA 提取
試劑盒組分:
RNApure Reagent 100ml
Buffer RW1 40ml*2
Buffer RW2 11ml*2
Rnase-free Water 10ml
Rnase-free吸附柱RB 50個*2
保存條件:
RNApure Reagent 4°C
其它組分 室溫
RNA 純化組織或植物的塊莖,可以在勻漿處理后 13,000×g 離心 10 分鐘以除去不溶物質(zhì),此時沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的 DNA,而 RNA 存在于上清中。
2.樣品中加入 RNApure 后反復(fù)吹打幾次,使樣本充分裂解。室溫放置 5 分鐘,使蛋白核酸復(fù)合物全分離。
3.以每 1ml RNApure 加入 200ul 氯仿的比例加入氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩 15 秒,室溫放置 2 分鐘。
4.13,000×g 離心 10 分鐘,此時樣品分為三層:有機相,中間層和上層無色水相,RNA主要在上層水相中,將上層水相移到一個新的 Rnase-free 離心管(自備)中。
5.在得到的水相溶液中加入 0.5 倍無水乙醇,顛倒混勻。
6.將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱 RB 中。若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。13,000×g 離心 30 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
7.向吸附柱中加入 700ul Buffer RW1,13,000×g 離心 30 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
8.向吸附柱中加入 500ul Buffer RW2(使用前檢查是否已加入無水乙醇),13,000×g 離心 30 秒,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9.重復(fù)步驟 8。
10.13,000×g 離心 2 分鐘,倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘,晾干。
注意:這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇殘留會影響后續(xù)酶促反應(yīng)(酶切、PCR 等)。
11.將吸附柱置于一個新的 Rnase-free 離心管(自備)中,向吸附柱的中間部位加入30-50ul Rnase-free Water,室溫放置 1 分鐘,13,000×g 離心 1 分鐘,收集 RNA 溶液,-70℃保存 RNA,防止降解。
注意:1)Rnase-free Wate 體積不應(yīng)小于 30ul,體積過小影響回收率。
2)如果要提高 RNA 的產(chǎn)量,可用 30-50ul 新的 Rnase-free Water 重復(fù)步驟 11。
3)如果要提高 RNA 濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟 11。
上海牧榮生物科技有限公司
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