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β1,3葡聚糖酶(β1,3GA)測試盒

簡要描述:β1,3葡聚糖酶(β1,3GA)測試盒,β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)試劑盒 上海牧榮生物科技有限公司專業實驗室產品

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  • 廠商性質:代理商
  • 更新時間:2024-05-06
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β1,3葡聚糖酶(β1,3GA)測試盒β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-glucanase,β-1,3-GA)試劑盒


正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義:

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中,催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解。在植物染病或處于其他逆境條件下,可誘導細胞大量合成β-1,3-GA,因此β-1,3-GA活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究。

測定原理:

β-1,3-GA水解昆布多糖,內切β-1,3-葡萄糖苷鍵,產生還原末端,通過測定還原糖生成速率來計算其酶活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;

試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存;臨用前加入2mL蒸餾水,充分溶解待用;用不完的試劑4℃保存;

試劑二:液體30mL×1瓶,4℃保存;

粗酶液提取:

1、細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

3、血清(漿)樣品:直接檢測。


測定步驟

  1. 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長至550nm,蒸餾水調零。

2、樣本測定(在1.5mL EP管中依次加入下列試劑):

試劑名稱(μL)

測定管

對照管

樣本

35

35

蒸餾水


35

試劑一

35


充分混勻,放入37℃水浴60 min

試劑二

230

230

充分混勻,95℃水浴5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中, 550nm處記錄各管吸光值A,如果吸光值大于2,可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式乘以相應稀釋倍數),ΔA=A測定-A對照。每個測定管需設一個對照管。


β-1,3-GA活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0958x -0.0192;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、血清(漿)β-1,3-GA活力的計算

單位的定義:每mL血清(漿)每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)

3、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA活力的計算

(1) 按蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

(2)   按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192) ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1:加入反應體系中樣本體積,0.035mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

b.96孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0479x -0.0192;x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。

2、血清(漿)β-1,3-GA活力的計算

單位的定義:每mL血清(漿)每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192)

3、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA活力的計算

  1. 按蛋白濃度計算

單位的定義:每mg組織蛋白每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義:每g組織每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h/g 鮮重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192) ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義:每1萬個細菌或細胞每小時產生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192)

V1:加入反應體系中樣本體積,0.035mL;V2:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

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