詳細介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,農業,制藥 |
β淀粉酶測試盒
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
淀粉酶負責水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。β-淀粉酶(EC 3.2.1.2)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖。
測定原理:
還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質。α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐熱。根據上述特性,鈍化其中之一,就可測出另一種淀粉酶的活力。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:30mL×1瓶,常溫保存,若有黃色晶體析出,需90℃加熱溶解后再用;
試劑二:15mL×1瓶,4℃保存,若出現沉淀析出,需70℃加熱溶解后再用。
粗酶液提取:
組織:稱取0.1~0.2g樣本(建議稱取約0.1g樣本),加入1mL蒸餾水,研磨勻漿;將勻漿倒入離心管中,提取液在室溫下放置提取15min,每5min振蕩1次,使其充分提取;3000g,25℃離心10min,取上清液加蒸餾水定容至10 mL,搖勻,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測定。
血清(漿)等液體樣本:(1)直接檢測α-淀粉酶。(2)吸取淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸餾水,搖勻,即為淀粉酶稀釋液,用于(α+β)淀粉酶總活力的測定。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調節波長到540 nm,蒸餾水調零。
2、試劑一和試劑二40℃預熱10min.
3、測定操作表:
試劑名稱(μL) | α淀粉酶活力測定 | 總淀粉酶活力測定 | ||
對照管 | 測定管 | 對照管 | 測定管 | |
淀粉酶原液 | 75 | 75 |
70℃水浴15min左右,冷卻
淀粉酶稀釋液 | 75 | 75 | ||
蒸餾水 | 75 | 75 | ||
試劑二 | 75 | 75 |
40℃恒溫水浴中準確保溫5min
試劑一 | 150 | 150 | 150 | 150 |
混勻,95度水浴5min,冷卻,取200μL 至微量石英比色皿或96孔板中,540nm處讀取吸光值,從左到右分別記為A1、A2、A3和A4。每個測定管需設一個對照管。
酶活性計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸曲線為y=3.7215x -0.1778; x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α淀粉酶活性
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.075×(A2-A1+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.1075×(A2-A1+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中α淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(A2-A1+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T=0.1075×(A2-A1+0.1778)
3、總淀粉酶活性計算
(1)按照樣品質量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min//g鮮重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=5.375×(A4-A3+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.5375×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中總淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mL) =5×[(A4-A3+0.1778)÷3.7215×V反總]÷V樣÷T
=0.5375×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性計算
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[5.375×(A4-A3+0.1778)-1.075×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中β-淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.5375×(A4-A3+0.1778)-0.1075×(A2-A1+0.1778)
5:總淀粉酶稀釋倍數;V反總:反應體系總體積,0.15mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.075 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,5min。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸曲線為y=2.481x -0.1778; x為標準品濃度(mg/mL),y為吸光值。
2、α淀粉酶活性
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
α淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T=1.612×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T =0.1612×(ΔA+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中α淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
α淀粉酶活性(mg/min/mL)=[(ΔA+0.1778)÷2.481×V反總]÷V樣÷T =0.1612×(ΔA+0.1778)
3、總淀粉酶活性計算
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=8.06×(ΔA+0.1778)÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷(V樣×Cpr)÷T
=0.806×(A4-A3+0.1778) ÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中總淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
總淀粉酶活性(mg/min/mL)=5×[(A4-A3+0.1778)÷2.481×V反總]÷V樣÷T
=0.806×(A4-A3+0.1778)
4、β-淀粉酶活性計算
(1)按照樣本質量計算
單位定義:每g組織在反應體系中每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/g鮮重)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[8.06×(A4-A3+0.1778)-1.612×(A2-A1+0.1778)]÷W
(2)按照蛋白質含量計算
單位定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活力單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=[0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)]÷Cpr
(3)血清(漿)等液體樣本中β-淀粉酶活性計算
單位定義:每mL血清(漿)每分鐘催化產生1mg還原糖定義為1個酶活性單位。
β-淀粉酶活性(mg/min/mL)=淀粉酶總活性-α-淀粉酶活性=0.806×(A4-A3+0.1778)-0.1612×(A2-A1+0.1778)
5:總淀粉酶稀釋倍數;V反總:反應體系總體積,0.15mL;V樣:加入反應體系中樣本體積,0.075 mL;V樣總:提取液總體積,10 mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;T:反應時間,5min。
上海牧榮生物科技有限公司
國內試劑耗材經銷代理。
國外試劑的訂購。可提供歐美實驗室品牌的采購方案。
提供加急物流處理,進口貨物,最快交期1-2周。
進出口貨物代理服務。
公司代理眾多有名生命科學領域的研究試劑、儀器和實驗室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
質量保證,所有產品都提供售后服務。付款方式靈活。公司堅持“一站式"服務模式,為客戶全面解決實驗、生產、開發需求。公司整合國際與國內資源,加強網絡建設,提高公司內部運作效率,為客戶提供方便、快捷的服務。
公司突出創新思維,提高工作效能,減低運作成本,為客戶提供優惠的價格。
β淀粉酶測試盒
產品咨詢