簡要描述:γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)定(比色法)測(cè)試盒: 上海牧榮生物科技有限公司專業(yè)實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品。
詳細(xì)介紹
品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
---|---|---|---|
應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),制藥 |
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)定(比色法)測(cè)試盒
注意:正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,產(chǎn)生谷氨酸鹽,在細(xì)胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
測(cè)定原理:
γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸,生成對(duì)硝基苯胺,在405nm有特征光吸收;通過測(cè)定405nm光吸收增加速率,來計(jì)算γ-GT酶活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體4mL×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體14.8mL×1瓶,4℃保存。
工作液(在試劑二瓶中配制):臨用前配制,把試劑三倒入試劑二瓶中,充分溶解(室溫過低時(shí)可以40℃水浴促進(jìn)溶解);然后把試劑四倒入試劑二瓶中,混勻后室溫保存。
粗酶液提取:
組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心15min,取上清,置冰上待測(cè)。
細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后8000g,4℃,離心15min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。
γ-GT測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到405 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動(dòng)物)水浴中預(yù)熱30min(保證無沉淀)。
3. 測(cè)定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,180μL工作液,混勻后于405nm測(cè)定10s和70s時(shí)吸光度,記為A1和A2。
γ-GT活性計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.006x+0.0016,x為對(duì)硝基苯胺濃度,y為吸光值,R2=0.999。
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/g 鮮重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1.67 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.006×V反總÷V樣÷T
= 1.67 × [ (A2-A1)-0.0016]
V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質(zhì)量;V樣:反應(yīng)體系中加入上清液體積(mL),20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),1min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y=0.003x+0.0016,x為對(duì)硝基苯胺濃度,y為吸光值,R2=0.999。
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/mg prot)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=3.34× [ (A2-A1)-0.0016] ÷ Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每克樣本每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/g 鮮重)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/104 cell)=[ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=3.34 × [ (A2-A1)-0.0016] ÷細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:25℃或者37℃中,每毫升液體每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為1個(gè)酶活單位。
γ-GT(μmol/min/mL)= [ (A2-A1)-0.0016]÷0.003×V反總÷V樣÷T
= 3.34 × [ (A2-A1)-0.0016]
V反總:反應(yīng)體系總體積(L),200μL=2×10-4L;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質(zhì)量,g;V樣:反應(yīng)體系中加入上清液體積(mL),20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),1min。
注意事項(xiàng):
培養(yǎng)細(xì)胞中γ-GT活性測(cè)定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在300萬-500萬之間,細(xì)胞中γ-GT的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞(防止因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性導(dǎo)致酶失活)。
配置好的工作液2周內(nèi)使用完畢。
上海牧榮生物科技有限公司
國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。
國外試劑的訂購。可提供歐美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。
提供加急物流處理,進(jìn)口貨物,最快交期1-2周。
進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。
公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌:CELL DATA,Alamanda Polymers, cstti,Click Chemistry tools,Nanoprobes,Ancell,NANOCS,Ambeed, Inc,SPEED BioSystems, LLC,Tulip Biolabs, Inc,Torrey Pines Biolabs,magsphere ,FabGennix International ,paratechs,Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。
質(zhì)量保證,所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式,為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源,加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè),提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率,為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。
公司突出創(chuàng)新思維,提高工作效能,減低運(yùn)作成本,為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。
γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γGT)測(cè)定(比色法)測(cè)試盒
產(chǎn)品咨詢