原地的雜交
納米金探針的小尺寸及其隨后接近核抗原的能力,與銀增強獲得的高靈敏度相結合,使它們成為用于特異DNA序列的超靈敏原位雜交檢測的優異試劑,無論有無原位PCR。使用生物素化的酪胺(催化報道沉積或CARD,也稱為酪胺信號擴增或TSA)擴增靶信號獲得了驚人的結果:用納米金-鏈霉抗生物素蛋白和銀增強檢測產物,即使在只有一個或兩個靶基因拷貝的細胞中也產生清晰的信號
用CARD擴增納米金-銀染技術檢測SiHa細胞中人乳頭瘤病毒16的單拷貝。這種來源于宮頸癌的細胞系僅含有一到幾個拷貝的人乳頭瘤病毒16,其表現為單個斑點。細胞離心制劑,核固紅復染(光學顯微照片由薩爾茨堡州蘭肯斯坦市G. Hacker博士提供。奧地利)。
優勢
- 比NBT-BCIP堿性磷酸酶或過氧化物酶結合標記擴增用于單基因拷貝解析更靈敏。
- 大多數情況下不需要更長的PCR程序:避免了由于錯誤引發和擴增子擴散導致的假陽性。
- 用標準明視野顯微鏡很容易看到黑色。不需要昂貴的熒光光學器件,也沒有自發熒光或漂白的問題。
- 黑色信號顏色與全強度標準細胞和核染色(H & E、核堅牢紅、甲基綠)兼容。
- 也可用于電磁研究的高空間分辨率信號。
電子顯微鏡
納米金為電子顯微鏡樹立了很好的性能標準。
納米金綴合物很容易擴散幾十微米到組織、滲透細胞和細胞核中,而大多數膠體金探針很難做到這一點。染色更符合化學計量,背景更低。盡管1.4納米金顆粒在50-120 kX放大倍數下甚至在80納米的切片中(在其他未染色的樣品中)都是直接可見的,但在用銀顯影劑(LI銀或HQ銀)短暫增強(1-5分鐘)后它們更容易顯現。即使使用醋酸鈾、鋨或檸檬酸鉛染色,也可以在較低的放大倍數下輕松看到2至100納米的銀顆粒(大小取決于顯影時間)。
這張掃描透射電子顯微鏡(STEM)圖像清楚地顯示,單馬來酰亞胺-納米金標記(箭頭)具體發生在IgG分子的鉸鏈硫醇位點。
光學和共聚焦顯微鏡
用抗微管蛋白初級抗體標記的紡錘體微管,隨后是(左)山羊抗小鼠膠體金或(右)山羊Fab抗小鼠納米金(光學顯微照片由俄亥俄州立大學D. Vandré和R. Burry博士提供。原始放大倍數= 1300倍)。
納米金探針對透化細胞和細胞核具有出色的穿透性,類似于免疫熒光探針,遠優于膠體金探針。“納米金-Fab"探針比免疫熒光IgG標記小。納米金探針絕對不會聚集,而且非常穩定,因為納米金與結合生物分子共價連接。通過隨后的短暫(5-15分鐘)銀增強(LI銀),它們給出了即使在普通明場光學顯微鏡(不需要紫外光學器件)中也可見的信號,其靈敏度通常優于熒光。由于同樣的納米金探針也可以用于電鏡,因此可以在光學顯微鏡或共聚焦顯微鏡下進行初步染色,同時可以在超微結構水平上檢查平行樣品。這種靈活性是熒光探針所不具備的。納米金現在可以與鏈霉親和素和抗生物素Fab’結合用于核酸檢測。
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印跡和免疫化學技術
納米金-抗體結合物已用于檢測《0.1皮克(7×10-19摩爾)的抗原。這種靈敏度優于大多數放射性、酶、膠體金或熒光技術。事實上,納米金標記是已知*靈敏的檢測方法之一。它與化學發光法不相上下,但提供了長期記錄,沒有膠片、顯影和暗室程序的麻煩,而且時間短得多。納米金試劑也可用于Westerns,我們的納米金-鏈霉親和素或納米金-抗生物素結合物可提供超靈敏的核酸檢測。
納米金免疫印跡
納米金-用鋰銀(納米探針)開發的針對小鼠IgG的抗小鼠抗體Fab。這些超小金顆粒很好地使銀沉積成核,從而實現了高的靈敏度。該免疫斑點印跡顯示出0.1皮克的靈敏度(箭頭)。
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納米金標記條帶的凝膠染色
蛋白質或其他分子用納米金標記后,可以在聚丙烯酰胺凝膠上運行。隨后,可能會開發出LI Silver或者GoldEnhance™對含金帶進行特殊染色。該過程快速、靈敏且具有選擇性,只需幾分鐘即可完成密集染色。它也適用于轉印污點。這可用于區分哪些成分用納米金標記