復蘇
1.從液氨中取出細胞凍存管,快速將其置入 37°水浴中解凍直至凍存管中無結晶,75%的酒精擦拭凍存管外壁:
2.將凍存管中的細胞移至含 6m 培養基的 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min;
3.棄上清,沉淀用 6ml培養基重懸,接種 25cm2培養瓶,于 37°C,5%CO2 細胞培養箱中培養
傳代:
(1) 貼壁細胞:
細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時,棄 25cm2 培養瓶中的培養液,用 PBS 清洗細胞一次。
添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1m 至培養瓶中,倒置微下觀客,待細胞回縮變圓后加入 5m 培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,將懸濃移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;
棄上清,沉淀細胞用 1-2m 培養基重懸,按1:2 比例進行分瓶傳代,補加培養基后放入 37,5%C02 細胞培養箱中培養
(2) 懸浮細胞
待細胞達到1x10^6/ml左右可按照以下方法換液培養或傳代
方法1:收集細胞,1000rpm 離心 5min,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻,將細胞懸液按 1: 2到 1: 3的比例分到合培養基的新中.
方法2:豎立放置培養瓶,細胞沉淀后棄去上半量培養基,將細胞懸液按 1: 2 到 1: 3 的比例分到含培養基的新瓶中.
凍存:
1.離心收集細胞并進行計數(參考離心條件: 1000rpm,5 min)。移去離心管中的上清液
2.加入適量的無血清細胞凍存液(EK-Bioscience 貨號: S002) 于離心管中,調整細胞濃度至1~5x10cells/L。輕柔混,制成細胞凍存懸液
3將離心管中的細胞凍存懸液分裝于已標示的凍存管中:
4.直接將含細胞懸液的凍存管放入-80C冰箱,長期冷凍保存或轉入液.